FHL2沉默对骨肉瘤U20S细胞增殖与凋亡的影响
卢文婷
刘爽
李赛赛
刘佳
徐颖茜
王建祥
王敏
1.300020,天津 中国医学科学院北京协和医学院实验血液学国家重点实验室2.300020,天津 中国医学科学院北京协和医学院实验血液学国家重点实验室3.300020,天津 中国医学科学院北京协和医学院实验血液学国家重点实验室4.300020,天津 中国医学科学院北京协和医学院实验血液学国家重点实验室5.300020,天津 中国医学科学院北京协和医学院实验血液学国家重点实验室6.300020,天津 中国医学科学院北京协和医学院实验血液学国家重点实验室7.300020,天津 中国医学科学院北京协和医学院实验血液学国家重点实验室
摘要：目的探讨沉默FHL2表达对骨肉瘤U20S细胞的增殖和凋亡的影响及其相关机制的研究.方法通过构建FHL2的shRNA干扰载体pLKO.1,制备慢病毒并感染U20S细胞,分为ShFHL2目的基因干扰组(shFHL2)和无关序列对照组(SCR);感染96 h后采用实时定量PCR(QPCR)和Western blotting检测两组FHL2 mRNA和蛋白水平.采用MTT方法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期的变化,Western blotting检测FHL2干扰后U20S细胞相关信号通路的蛋白表达变化.利用双荧光素酶报告基因系统检测FHL2对P53下游基因转录调控的影响.结果与SCR组比较,shFHL2组感染96 h后FHL2 mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05) . shFHL2组感染24、48、72、96 h的细胞增殖比分别为1.73±0.08、2.49±0.38、3.26±0.45和4.28±0.29,其中96h的细胞增殖比低于SCR组(P<0.05) ;shFHL2组感染96 h的细胞凋亡率为(17.55±1.05)％,高于SCR组的(7.73±1.12)％,差异有统计学意义(P<0.05);shFHL2组感染96 h的期细胞为(68.18±0.78)％,高于SCR组的(59.73±2.28)％,差异有统计学意义(P<0.05).干扰FHL2表达能够显著上调P53、P21和Bax的表达水平并能增强p53对Bax启动子的促转录活性.结论沉默FHL2表达可明显抑制骨肉瘤U20S细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞阻滞于G0/G1期;FHL2介导了 P53对Bax启动子的转录调节作用.FHL2可能会成为新的肿瘤治疗靶点,其机制与p53/Bax和p53/p21通路相关.
关键词：骨肉瘤FHL2U20S细胞株增殖凋亡
分类号：R738.6(运动系肿瘤)
资助基金：中国高校基本科研业务费专项资金资助项目(3332016095)中国医学科学院医学与健康科技创新工程资助项目(2016-I2M-1-001)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1-6 )
英文信息