下调微小RNA-3917对肺腺癌A549细胞增殖及PER2表达的影响
李鹏1
温石磊2
张锋3
1.450008,郑州 郑州大学附属肿瘤医院 河南省肿瘤医院呼吸内科2.450008 郑州 郑州大学附属肿瘤医院 河南省肿瘤医院呼吸内科;610064 四川大学华西基础医学与法医学院3.450008 郑州 郑州大学附属肿瘤医院 河南省肿瘤医院呼吸内科;475000 河南大学淮河医院胸心外科
摘要：目的探讨微小RNA-3917(miR-3917)对肺癌细胞增殖及对生物钟基因Period2(PER2)表达的影响.方法取复苏后的肺腺癌A549细胞培养至对数生长期,采用脂质体法向A549细胞转染10、20、50 nmol/L靶向miR-3917的 siRNA表达载体pEGFP-miR-3917-siRNA质粒,转染48 h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达;根据实验设计分为对照组、空载体组和干扰组,空载体组及干扰组的质粒浓度均为50 nmol/L,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测转染48 h后的 miR-3917相对表达量,QPCR和Western blotting分别检测转染48 h后的PER2 mRNA和蛋白水平,采用CCK-8法检测各组转染24、48、72 h的A549细胞增殖抑制率,双荧光素酶靶标实验验证miR-3917与PER2的相互关系.结果QPCR检测发现对照组、空载体组和干扰组的miR-3917相对表达量依次为1.007±0.018、1.068±0.084和0.171±0.052,干扰组的miR-3917相对表达量低于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05).对照组、空载体组和干扰组的PER2 mRNA相对表达量依次为1.060±0.129、1.086±0.229和2.920±0.927,蛋白表达量依次为0.204±0.046、0.183±0.043和0.512±0.117,干扰组的 PER2 mRNA和蛋白水平均高于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.05).与对照组和空载体组比较,干扰组的A549细胞增殖能力下降,转染24、48、72h后的增殖抑制率依次为(34.192±5.268)％、(33.527±6.603)％和(30.591±7.788)％,均高于其余两组,差异有统计学意义(P<0.05).miR-3917可显著抑制野生型PER2-3' UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性,而对突变型PER2-3'UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性并无影响.结论下调miR-3917可抑制肺癌细胞增殖并升高PER2水平, miR-3917对PER2有靶向调控作用,可作为肺癌防治的新靶点.
关键词：肺癌A549细胞株细胞增殖微小RNA3917生物钟基因Period2(PER2)
分类号：R734.2(呼吸系肿瘤)
资助基金：河南省医学科技攻关计划(201602280)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 13-18 )
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