微小RNA-320靶向FOXM1调控食管鳞癌放射敏感性的机制研究
张潇文
秦嗪
孙新臣
1.210009南京,南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院放疗科2.210009南京,南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院放疗科3.210009南京,南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院放疗科
摘要：目的 探讨微小RNA-320(miR-320)对食管鳞癌(ESCC)放射敏感性的影响及可能机制.方法 采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测正常食管上皮细胞株HEEC和ESCC细胞株KYSE-150、TE-13和Eca-109中miR-320和叉头框蛋白M1(FOXM1)的表达水平.采用脂质体法将miR-320模拟物(mimics)及其阴性对照(NC)转染至Eca-109细胞,分为转染组和对照组.QPCR和Western blotting检测miR-320 mimics转染后FOXM1的蛋白和mRNA水平以评价miR-320对FOXM1的调控作用.克隆形成实验评价克隆形成能力;免疫荧光实验检测γH2AX荧光焦点数;Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡;Western blotting测定XIAP、Bax、Bcl-2和cleavedcaspase-3的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-320与FOXM1之间的靶向关系.结果 QPCR检测显示,Eca-109细胞中miR-320相对表达量最低,FOXM1相对表达量最高,故选取该细胞株进行后续实验.转染48 h后,转染组miR-320表达量显著高于对照组;QPCR和Western blotting检测发现转染组FOXM1 mRNA和蛋白水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,转染组Eca-109细胞克隆形成能力显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);转染组照射处理后1、6、24 h γH2AX焦点数增加,差异有统计学意义(P＜0.05).转染组Eca-109细胞的凋亡率高于对照组(P＜0.05).与对照组比较,转染组Bax和cleaved caspase-3表达增加,XIAP和Bcl-2表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).在野生型FOXM1-3'UTR质粒转染细胞中,miR-320 mimics转染组Eca-109细胞的荧光素酶活性明显低于对照组(P＜0.05);而在突变型质粒转染细胞中,两组细胞的荧光素酶活性的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 miR-320能增强ESCC细胞放射敏感性,可能与靶向抑制FOXM1表达有关.
关键词：食管鳞癌放射敏感性微小RNA-320(miR-320)叉头框蛋白M1(FOXM1)
分类号：R735.1(消化系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81502653)江苏省青年医学重点人才项目(QNRC2016572)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 481-488 )
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