沉默GPER1表达逆转乳腺癌细胞三苯氧胺耐药的实验研究
李啸天
薛国军
杨光伦
1.400016,重庆 重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科2.400016,重庆 重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科3.400016,重庆 重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科
摘要：目的 探讨沉默G蛋白偶联雌激素受体1(GPER1)对乳腺癌MCF?7细胞三苯氧胺( TAM)的逆转作用及可能的作用机制.方法 体外培养乳腺癌TAM耐药细胞株MCF?7TAMR及其亲本非耐药细胞株MCF?7,采用MTT法检测MCF?7TAMR细胞对TAM的耐药性. shCtrl、shGPER1?1、shGPER1?2和 shGPER1?3分别转染 MCF?7TAMR细胞为 shCtrl组、shGPER1?1组、shGPER1?2组和shGPER1?3组,另设空白对照组(CTL组),实时荧光定量PCR(QPCR)鉴定转染效果.采用 MTT法和Ca2+荧光检测法检测shGPER1?1组细胞增殖活性和Ca2+变化. Western blotting检测各组自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3 (LC3?Ⅱ)和Beclin 1表达;采用免疫荧光技术观察细胞自噬泡的形成情况.结果 MCF?7和MCF?7TAMR对TAM的半数抑制浓度(IC50)分别为1.15 nmol／L和19.47 nmol／L. MCF?7TAMR的耐药指数( RI)为16.93. MCF?7细胞和MCF?7TAMR细胞中GPER1的表达水平分别为1.00±0.08和1.27±0.12,差异有统计学意义(P＜0.05). shGPER1?1、shGPER1?2、shGPER1?3组中GPER1的表达水平分别为0.45±0.09、0.66±0.08、0.91±0.07,均较CTL组和shCtrl组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05). shGPER1?1组经TAM作用1～2 min内细胞内Ca2+浓度迅速升高,而CTL组和shCtrl组变化不明显. 0.01、0.1、1、10、100 nmol／L TAM 对shGPER1?1组细胞的增殖抑制率分别为(5.44±1.79)%、(17.64±2.34)%、(40.56±3.79)%、(69.51±3.70)%、(76.62±4.15)%,高于CTL组和shCtrl组细胞(P＜0.05). IC50为2.41 nmol／L. shGPER1?1组对TAM的敏感性较CTL组增加7.08倍. shGPER1?1组Beclin1、LC3?Ⅱ蛋白表达量分别为0.45±0.10、0.33±0.07,低于CTL组和shCtrl组(P＜0.05);shGPER1组LC3?Ⅱ荧光斑点的数量明显少于CTL组和shCtrl组.结论 沉默GPER1表达可逆转MCF?7TAMR细胞对TAM的耐药性,其可能的作用机制可能与抑制细胞保护性自噬有关.
关键词：乳腺癌GPER1三苯氧胺耐药性自噬
分类号：R737.9(泌尿生殖器肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81072149)
论文发表日期：2019-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 779-784 )
英文信息