微小RNA?452?5p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能机制?

唐小乔; 桑剑锋; 张寅; 史先彪; 苏磊

摘要：探讨微小RNA?452?5p(miR?452?5p)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制.方法采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测 miR?452?5p在乳腺癌细胞株 MDA?MB?231、MCF?7、MDA?MB?361、HCC70和正常乳腺细胞株MCF?10A中的表达水平,选取表达水平最低的细胞株进行后续实验.脂质体转染法将miR?452?5p mimic及阴性对照转染至人乳腺癌MDA?MB?231细胞,并设空白对照组. QPCR检测转染效果,EdU增殖实验和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白procaspase?3和procaspase?9的表达水平,生物信息学软件TargetScan预测miR?452?5p与血管内皮生长因子A(VEGF?A)的靶向结合位点,Western blotting和双荧光素酶报告基因实验验证二者靶向关系.结果 miR?452?5p在乳腺癌细胞株MDA?MB?231(0. 26±0. 02)、MCF?7(0. 35±0. 04)、MDA?MB?361(0. 49±0. 05)和HCC70 (0. 67±0. 07)中的表达量均明显低于正常乳腺细胞株MCF?10A(1. 00±0. 11),差异有统计学意义( P＜0. 05),选取表达量最低的MDA?MB?231细胞进行后续实验. QPCR检测显示,与阴性对照组比较,miR?452?5p组MDA?MB?231细胞中miR?452?5p的表达量上调(0. 95±0. 09 vs.4. 28±0. 44,P＜0. 05),而空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P＞0. 05). EdU检测显示,与阴性对照组比较,miR?452?5p 组细胞增殖率降低( P＜0. 05),而空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义( P＞0. 05).克隆形成实验显示,与阴性对照组比较,miR?452?5p组细胞克隆形成数目均减少[(77. 65±7. 84)个 vs.(53. 22±6. 16)个, P＜0. 05)],空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P＞0. 05).流式细胞术检测显示,与阴性对照组比较,miR?452?5p组细胞凋亡率升高[(2. 21±0. 46)% vs.(20. 61±3. 09)%, P＜0. 05)],而空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义(P＞0. 05). Western blotting 检测显示,与阴性对照组比较, miR?452?5p 组 procaspase?3 ( 1. 20 ± 0. 13 vs.0. 49 ± 0. 05 )和procaspase?9(1. 49±0. 20 vs.0. 38±0. 04)蛋白表达下调(P＜0. 05),空白对照组与阴性对照组的差异无统计学意义( P＞0. 05).Western blotting检测显示,与阴性对照组比较,miR?452?5p组细胞中VEGF?A蛋白表达下降( P＜0. 05).双荧光素酶报告基因显示,VEGF?A?Wt组与阴性对照比较,miR?452?5p相对荧光素酶活性降低( P＜0. 05),而VEGF?A?Mut组和阴性对照miR?452?5p相对荧光素酶活性无显著改变(P＞0. 05).结论 miR?452?5p在乳腺癌细胞株中呈低表达,miR?452?5p通过调控VEGF?A的表达影响乳腺癌细胞的增殖和凋亡.