RP11-273G15.2靶向微小RNA-9-5p对肝癌细胞增殖和凋亡的影响
刘艳1
沈涛2
黄媚1
凌丽华1
1.215200 江苏苏州 苏州市第九人民医院传染科2.215200 苏州市第九人民医院普外科
摘要：目的 探讨长链非编码RNA RP11-273G15.2靶向调控微小RNA-9-5p(miR-9-5p)表达及对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用GEPIA分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中269例肝癌组织和50例正常组织的RP11-273G15.2水平;实时定量PCR(qPCR)检测正常人肝细胞HL-7702和肝癌细胞(SMMC-7721、HepG2和BEL-7404)的RP11-273G15.2水平,构建过表达RP11-273G15.2的pcDNA3.1质粒并采用脂质体转染SMMC-7721细胞(过表达组),同时设未行转染的细胞为空白对照组和转染空载pcDNA3.1质粒的阴性对照组.采用qPCR、噻唑蓝(MTT)比色法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测RP11-273G15.2水平、细胞活力和凋亡率,qPCR和Western blotting检测凋亡相关因子的表达情况,利用LncBase Pre-dicted v.2在线预测RP11-273G15.2可能结合的下游miRNAs并筛选miR-9-5p为研究目标,构建pGL3荧光素酶报告载体并采用双荧光素酶报告分析系统验证RP11-273G15.2对miR-9-5p的结合能力.结果 GEPIA分析结果 显示,269例肝癌组织的RP11-273G15.2水平低于50例正常组织(P<0.05).肝癌细胞的RP11-273G15.2水平均低于HL-7702细胞(P<0.05),选取RP11-273G15.2水平最低的SMMC-7721细胞进行后续过表达实验;与其余两组相比,过表达组的RP11-273G15.2水平升高而miR-9-5p水平降低且转染48～72 h的细胞活力减弱(P<0.05).过表达组的凋亡率为(26.173±3.065)％,均高于空白对照组的(11.567±2.135)％和阴性对照组的(10.136±1.740)％(P<0.05).与其余两组相比,过表达组的Bcl-2水平降低,而Bax、caspase-3和cleaved caspase-3水平升高(P<0.05).MiR-9-5p模拟物能抑制转染野生型pGL3质粒的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型质粒无影响(P>0.05).结论 肝癌组织和细胞中RP11-273G15.2低表达且发挥抑癌作用,上调其水平可抑制增殖并诱导凋亡,可能与靶向miR-9-5p有关,RP11-273G15.2/miR-9-5p轴在肝癌治疗中有一定潜能.
关键词：肝癌长链非编码RNARP11-273G15.2增殖凋亡微小RNA-9-5p
分类号：R735.7(消化系肿瘤)
论文发表日期：2020-05-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 405-411 )
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