微小RNA-18a-3p靶向调控HEPN1及对骨肉瘤细胞迁移侵袭的影响
李涛1
李娜2
李佳1
王磊1
1.810000 西宁 青海省人民医院骨三科2.810000 青海省人民医院神经内科
摘要：目的 探讨微小RNA-18a-3p(miR-18a-3p)对肝细胞癌下调蛋白1(HEPN1)的靶向调控作用及对骨肉瘤(OS)细胞侵袭迁移的影响.方法 从美国国家生物技术信息中心(NCBI)的GEO数据库中下载基因表达谱OS样本数据集GSE65071的series matrix数据,分析OS患者和健康对照的血浆miR-18a-3p水平;采用实时定量PCR检测OS细胞MG63和成骨细胞hFOB 1.19的miR-18a-3p和HEPN1 mRNA水平,Western blotting检测HEPN1蛋白水平;脂质体介导miR-18a-3p抑制物转染MG63细胞(Inhibitor组),同时设NC组(转染阴性对照序列)和对照组(仅予脂质体处理而未行转染),活细胞计数(CCK-8)法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数以评估增殖和迁移侵袭能力,构建pmir-GLO载体并借助双荧光素酶报告检测系统验证miR-18a-3p与HEPN1间的靶向关系.结果 GSE65071数据集显示,20例OS患者的血浆miR-18a-3p水平为7.262±0.494,高于15例健康对照的6.005±0.081(P<0.05).与hFOB 1.19细胞相比,MG63细胞的miR-18a-3p水平升高至3.361±0.257,而HEPN1 mRNA水平降低至0.571±0.068,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组和NC组相比,Inhibitor组的miR-18a-3p水平降低,而HEPN1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验结果 显示,miR-18a-3p模拟物可抑制转染野生型HEPN13'端非翻译区质粒的细胞相对荧光素酶活性(P<0.05),但对转染突变型质粒的细胞无影响(P>0.05).与对照组和NC组相比,Inhibitor组转染后24 h的增殖活力有降低趋势(P>0.05),而转染48～96 h的增殖活力降低(P<0.05);Inhibitor组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(22.339±4.172)％和(153.673±7.570)个,均低于对照组的(63.007±3.841)％和(365.336±10.772)个及NC组的(65.670±3.101)％和(366.335±13.596)个(P<0.05).对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-18a-3p在OS中高表达且发挥促癌的作用,下调其表达可抑制OS细胞的增殖和迁移侵袭能力,可能与靶向HEPN1有关,miR-18a-3p/HEPN1轴有可能成为OS治疗的潜在靶点.
关键词：骨肉瘤微小RNA-18a-3p迁移侵袭肝细胞癌下调蛋白1
分类号：R738.6(运动系肿瘤)
论文发表日期：2020-05-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 412-417 )
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