MGMT基因沉默增强黑色素瘤细胞对替莫唑胺敏感性的研究
任冰洁1
李强2
赵晶3
陶敏1
梁容瑞1
胡颖熹1
1.215006 江苏苏州 苏州大学附属第一医院肿瘤科2.330029 江西省肿瘤医院淋巴血液肿瘤科3.215006 苏州大学附属第一医院放疗科
摘要：目的 探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)基因沉默对人黑色素瘤细胞替莫唑胺(TMZ)敏感性的影响.方法 将前期构建的靶向MGMT基因特异性短发夹型RNA(shRNA)干扰载体转染人黑色素瘤A375细胞.根据转染质粒的不同及是否加药分组如下:对照组、TMZ组、阴性对照(NC)组、NC-TMZ组、MGMT干扰(MGMTi)组和MGMTi-TMZ(MGMT干扰联合TMZ)组.通过实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blotting和免疫荧光验证质粒载体的干扰效率,MTT法和流式细胞术检测TMZ处理24、48和72 h后A375细胞的增殖和凋亡情况.Western blotting和免疫荧光检测ATR、ATM和γ-H2AX水平以评价细胞DNA的损伤程度.结果 转染MGMT shRNA干扰载体后,MGMTi组MGMT在mRNA和蛋白水平与对照组相比降低(P<0.05).MTT、流式细胞仪、Western blotting和免疫荧光检测结果显示,MGMTi-TMZ组的细胞抑制率、凋亡率及ATR、ATM和γ-H2AX水平较其他组明显升高(P<0.05).结论 沉默MGMT基因的表达能够增强TMZ对A375细胞增殖的抑制作用并促进细胞凋亡,同时增强DNA损伤作用.通过沉默MGMT基因可以提高人黑色素瘤A375细胞对TMZ的敏感性.
关键词：黑色素瘤O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶替莫唑胺化疗增敏DNA损伤
分类号：R739.5(皮肤肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(81402477)国家自然科学基金(81602802)江苏省自然科学基金(BK20140295)江苏政府留学奖学金(JS-2018-179)
论文发表日期：2020-12-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1057-1063 )
英文信息