miR-9/Beclin1信号轴在口腔鳞癌细胞株Tca83顺铂耐药表型形成中的实验研究
李璐
王拓
邵华英
江帆
1.637000 四川南充 川北医学院附属医院口腔科2.637000 四川南充 川北医学院附属医院口腔科3.637000 四川南充 川北医学院附属医院口腔科4.637000 四川南充 川北医学院附属医院口腔科
摘要：目的 探讨下调miR-9表达在口腔鳞癌Tca83细胞对顺铂(DDP)耐药性的影响以及可能的作用机制.方法 体外培养口腔鳞癌亲本细胞株Tca83及耐药细胞株Tca83DDPR.实时荧光定量PCR(QPCR)法检测Tca83细胞和Tca83DDPR细胞miR-9和Beclin1 mRNA的表达.分别沉默Tca83细胞中miR-9和Beclin1的表达,设置Tca83细胞空白对照(CTL)组、miR-9 inhibitor组、si-NC1组、miR-9 inhibitor+si-Beclin1组、si-NC2组.MTT法检测不同浓度DDP对上述各组细胞增殖活性的抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI).采用GFP荧光法观察自噬泡形成.Western blotting检测Beclin1和微管相关蛋白1轻链3-β(LC3-Ⅱ)蛋白的表达.双荧光素酶报告实验分析miR-9与Beclin1的靶向关系.结果 与Tca83细胞比较,Tca83DDPR细胞miR-9表达量(0.79±0.08)降低,而Beclin1表达量(1.27±0.14)升高,差异有统计学意义(P<0.05).miR-9 inhibitor组和miR-9 inhibitor+si-Beclin1组Tca83细胞中miR-9的表达量分别为0.39±0.05和0.37±0.04,明显低于CTL组、si-NC1组、si-NC2组(P<0.05).miR-9 inhibitor+si-Beclin1组Tca83细胞中Beclin1表达量为0.45±0.06,低于CTL组、si-NC1组、miR-9 inhibitor组、si-NC2组(P<0.05).MTT法检测,DDP对Tca83细胞和Tca83DDPR细胞IC50分别为27.19μg/ml和475.69μg/ml.Tca83DDPR细胞的RI为17.50.DDP对miR-9 inhibitor组Tca83细胞IC50为284.53μg/ml.miR-9 inhibitor组Tca83细胞的RI为10.46.双荧光素酶报告实验分析,Beclin1是miR-9的下游靶基因.Tca83DDPR细胞自噬泡形成率高于Tca83细胞(P<0.05).miR-9 inhibitor组Tca83细胞自噬泡形成率明显高于CTL组Tca83细胞(P<0.05).而miR-9 inhibitor+si-Beclin1组Tca83细胞自噬泡形成率明显减少,与miR-9 inhibitor组比较,差异有统计学意义(P<0.05).Western blotting结果 显示,miR-9 inhibitor组Tca83细胞Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达量为0.79±0.15和0.41±0.10,高于CTL组和si-NC1组(P<0.05).miR-9 inhibitor+si-Beclin1组Tca83细胞Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达量为0.34±0.09和0.16±0.05,低于其他各组(P<0.05).结论 下调Tca83细胞中miR-9表达后,Beclin1表达相应增加,通过增加细胞自噬活性,降低DDP对肿瘤细胞增殖活性的抑制作用,从而诱导Tca83细胞对顺铂的耐药性.
关键词：口腔鳞癌miR-9Beclin1自噬顺铂耐药性
分类号：R739.85(口腔、颌面部肿瘤)
论文发表日期：2021-02-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 110-116 )
英文信息