miR-32-5p通过调节Twist1抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭
欧阳丽1
陈继东2
周赤1
贺春雪1
陈泉1
刘庆1
1.430070 武汉 湖北省中医院病理科2.430070 湖北省中医院内分泌科
摘要：目的 探讨miR-32-5p在甲状腺癌组织中的表达及其对甲状腺癌细胞生物学行为的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测甲状腺癌组织和对应癌旁组织中miR-32-5p的表达水平,筛选miR-32-5p高表达的甲状腺癌细胞系TPC-1细胞和低表达的甲状腺癌细胞系 KTC-1 细胞.采用 miR-32-5p inhibitor转染 TPC-1 细胞(inhibitor-miR-32-5p)和miR-32-5p mimics转染KTC-1细胞(mimics-miR-32-5p),另分别转染无关系列作为阴性对照(inhibitor-NC和mimics-NC).使用平板克隆形成、CCK-8法检测各组细胞增殖能力,划痕实验、Transwell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting检测各组细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白的表达水平.采用荧光素酶报告基因测定Twist1 与miR-32-5p的关系;利用转染法分别上调 mimics-miR-32-5p-KTC-1 细胞及沉默 inhibitor-miR-32-5p-TPC-1 细胞中Twist1 的表达,并检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力和EMT相关蛋白的表达水平.结果 甲状腺癌组织中的miR-32-5p水平显著低于对应癌旁组织(P＜0.05).甲状腺癌细胞系中miR-32-5p的表达水平也显著低于正常HTORI-3 细胞系,其中TPC-1细胞miR-32-5p表达水平最高,KTC-1细胞miR-32-5p表达水平最低.过表达miR-32-5p后KTC-1 细胞 96h 的增殖活性、克隆形成能力、细胞迁移及侵袭能力下降,细胞凋亡率上升(P＜0.05),同时EMT标志物E-cadherin表达升高,N-cadherin、Fibronectin、Snail和Vimentin的表达水平下降(P＜0.05).敲低miR-32-5p后TPC-1 细胞 96h 的增殖活性、克隆形成能力、细胞迁移及侵袭能力升高,细胞凋亡率下降(P＜0.05),同时EMT标志物E-cadherin表达下降,N-cadherin、Fibronectin、Snail和Vimentin的表达水平上升(P＜0.05).miR-32-5p可抑制野生型Twist1-3′-UTR的荧光素酶活性(P＜0.05),而对突变型Twist1-3′-UTR的荧光素酶活性无影响(P＞0.05).通过RNA干扰Twist1 后功能学实验验证发现,上调Twist1 后可回复miR-32-5p过表达对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的抑制,沉默Twist1 后可回复miR-32-5p低表达对细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的增强.Western blotting检测结果显示,上调或下调Twist1 均可回复miR-32-5p对EMT过程的调控作用.结论 miR-32-5p通过靶向Twist1 在甲状腺癌中作为肿瘤抑制因子抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.
关键词：甲状腺癌miR-32-5pTwist1增殖凋亡迁移侵袭
分类号：R736.1(内分泌腺肿瘤)
资助基金：湖北省卫生计生科研项目(WJ2019M225)
论文发表日期：2023-09-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：9( 769-777 )
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