外泌体递送miR-15a/16靶向PD-L1抑制胃癌免疫逃逸的分子机制研究
曲雅静1
宁涛2
李志宏1
史晓雄1
霍莉莉1
陈慧1
任贵兵1
1.300060 天津市肿瘤医院消化肿瘤内科2.300162 天津 中国人民武装警察部队特色医学中心肿瘤科
摘要：目的 探讨人工修饰的转运miR-15a/16外泌体通过靶向调控程序性死亡配体1(PD-L1)抑制胃癌免疫逃逸的分子机制.方法 Western blotting检测PD-L1在胃癌组织和正常组织中的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌患者血浆及胃癌组织中miR-15a、miR-16水平.生物信息学数据库预测miR-15a/16下游调控靶基因PD-L1 mRNA,荧光素酶报告基因实验验证二者靶向结合关系.体外实验,分别将NC、miR-15a、miR-16、miR-15a/16的模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitors)转染至胃癌细胞后,检测各组中PD-L1蛋白和mRNA水平;构建装载miR-15a、miR-16、miR-15a/16的修饰外泌体exo-miR-15a、exo-miR-16、exo-miR-15a/16,检测各组中PD-L1蛋白和mRNA水平.体内实验,利用小鼠肿瘤模型评估exo-miR-15a/16的抑瘤作用;流式细胞术分析exo-miR-15a、exo-miR-16、exo-miR-15a/16对CD8+干扰素(IFN)-γ+T细胞水平的影响;评估小鼠存活率.结果 PD-L1在胃癌组织中高表达;miR-15a、miR-16在胃癌患者血浆及胃癌组织中水平降低,肿瘤分期越晚,降低越显著(P＜0.05).miR-15a、miR-16与PD-L1 mRNA存在靶向结合关系.体外实验显示转染miR-15a mimics、miR-16 mimics 后,miR-15a、miR-16 水平上调而 PD-L1 表达降低,共转染 miR-15a/16 mimics 时 PD-L1 表达最低;转染 miR-15a inhibitors、miR-16 inhibitors 后,miR-15a、miR-16 水平下调而 PD-L1 表达升高,共转染 miR-15a/16 inhibitors 时 PD-L1 表达最高(P＜0.05).exo-miR-15a、exo-miR-16、exo-miR-15a/16抑制胃癌细胞PD-L1表达,在体内抑制小鼠肿瘤生长,其中exo-miR-15a/16的抑制作用最显著(P＜0.05).exo-miR-15a/16相对增加了 CD8+INF-γ+T细胞的比例,从而增强了抗肿瘤免疫活性,抑制胃癌生长,提高小鼠存活率.结论 修饰外泌体作为新型纳米脂质体,在体内和体外负载miR-15a/16负向调控PD-L1表达,抑制胃癌免疫逃逸和肿瘤生长.
关键词：胃癌修饰外泌体PD-L1miR-15a/16免疫逃逸
分类号：R735.2(消化系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(82072664)
论文发表日期：2025-02-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：8( 105-112 )
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