构建以 eGFP 为报告基因的毕赤酵母表达载体
陈志文1
冯姣1
蒋敏敏1
陈春梅1
肖星1
何娅1
易修文1
陈庭金2
席丽艳1
1.中山大学孙逸仙纪念医院皮肤科,广东 广州,5101202.中山大学中山医学院寄生虫学教研室,广东广州,510080
摘要：目的：构建以绿色荧光蛋白eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体，为后续致病真菌功能基因的eGFP融合基因过表达作铺垫。方法：利用In-Fusion系统构建eGFP的表达载体PPICZαB-eGFP，氯化锂转化毕赤酵母X33，通过含Zeocin（100μg／mL）抗性的YPD培养基筛选，将得到的菌落X33－eGFP以引物3′－AOX／5′－AOX及 eGFP－F／eGFP－R进行PCR，产物行琼脂糖凝胶电泳、测序验证eGFP片段是否成功插入，最后甲醛诱导表达。结果：以 X33－eGFP为模板的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示片段eGFP成功插入至载体中，测序验证无突变。经甲醛诱导后的毕赤酵母X33－eGFP在蓝色荧光激发下，可观察到发出绿色荧光。结论：成功建立了毕赤酵母X33－eGFP，且证明了eGFP片段可以在毕赤酵母AOX启动子中得到表达。
关键词：绿色荧光蛋白毕赤酵母克隆
分类号：R34(基础医学)
资助基金：国家自然科学基金(81171545)
论文发表日期：2016-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 152-155 )
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