Keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞系的构建
郑雯1
钟亚丹2
王炫1
刘慧婷1
杨斌1
刘军1
1.南方医科大学皮肤病医院,广东 广州 5100912.佛山市第一人民医院,广东 佛山 528010
摘要：目的 利用CRISPR/Cas9技术构建一种keratin 5-IRES-eGFP敲入的人胚胎干细胞(hESCs)系,为研究表皮基底角质形成细胞异常的皮肤病提供一种细胞模型.方法 构建针对目的基因keratin 5的sgRNA质粒及打靶Donor质粒,利用CRISPR/Cas9技术完成对keratin 5的定向切割,将IRES-eGFP敲入至keratin 5终止密码子上游,诱导hESCs分化为表达绿色荧光蛋白(GFP)的基底层角质形成细胞.结果 PCR及Sanger测序结果表明IRES-eGFP成功整合至hESCs细胞系的keratin 5终止密码子上游,分化培养后观察细胞形态与角质形成细胞系HaCat形态一致.免疫荧光染色验证hESCs分化获得的ES-KC细胞系稳定表达GFP与keratin 5.结论 成功制备了keratin 5-IRES-eGFP敲入的hESCs细胞系,并诱导hESCs成功分化出带有绿色荧光蛋白标记的基底层角质形成细胞.
关键词：人胚胎干细胞CRISPR/Cas9技术角蛋白5基底层角质形成细胞
资助基金：中国博士后科学基金面上项目(2019M662983)
论文发表日期：2022-08-28
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 299-304 )
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