牛副流感3型NP融合蛋白原核表达及 间接ELISA检测方法的建立
王苗苗
张玲玲
张峣
冉旭华
闻晓波
1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江 大庆,1633192.黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江 大庆,1633193.黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江 大庆,1633194.黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江 大庆,1633195.黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江 大庆,163319
摘要：为原核表达牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)NX49株截短NP融合蛋白并以此建立间接ELISA检测方法,本研究采用RT-PCR方法扩增了BPIV3截短NP蛋白基因序列并克隆至pET-28a中进行诱导表达,纯化后产物进行Western blot分析.以重组蛋白作为包被抗原,建立并优化检测BPIV3抗体的间接ELISA方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行验证.结果成功表达出截短的NP重组蛋白,该重组蛋白具有良好的反应原性.间接ELISA优化结果如下:抗原包被浓度为4μg/mL,37℃包被1h后4℃过夜,待检血清以1:80倍稀释37℃孵育1h,5％脱脂乳37℃封闭1h.二抗以1:5000倍稀释37℃孵育1h,TMB显色时间为15min.以该蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法其特异性为97.4％,敏感性为95.3％,批内、批间检测结果变异系数均小于10％.本试验成功建立检测BPIV3抗体的间接ELISA方法,该方法具有较强的特异性、良好的重复性及敏感性,为开展牛呼吸道疾病综合征的流行病学调查、实验室诊断奠定了基础.
关键词：牛副流感病毒3型NP基因原核表达间接ELSIA
分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)
资助基金：黑龙江省农垦总局攻关课题(HNK125B-11-08A)
论文发表日期：2018-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1-7 )
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