铜绿假单胞菌flgE基因PCR检测方法的初步建立
宫强
杜珍奇
冯礼尚
樊泽军
冯洋洋
孙鹏飞
程梦琦
1.河南科技大学/河南省食品微生物工程技术研究中心,河南 洛阳 4710232.河南科技大学/河南省食品微生物工程技术研究中心,河南 洛阳 4710233.河南科技大学/河南省食品微生物工程技术研究中心,河南 洛阳 4710234.河南科技大学/河南省食品微生物工程技术研究中心,河南 洛阳 4710235.河南科技大学/河南省食品微生物工程技术研究中心,河南 洛阳 4710236.河南科技大学/河南省食品微生物工程技术研究中心,河南 洛阳 4710237.河南科技大学/河南省食品微生物工程技术研究中心,河南 洛阳 471023
摘要：为建立一种基于铜绿假单胞菌flgE基因的PCR检测方法,本试验根据GenBank中已发表的铜绿假单胞菌flgE基因序列,设计合成了1对特异性引物,由铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增获得了目的基因.从退火温度、循环次数、Mg2+浓度、dNTPs浓度和引物浓度5个方面优化了反应条件,并检测了该方法的特异性和敏感性.结果成功扩增出了铜绿假单胞菌1400 bp的flgE特异性基因片段,最佳退火温度、循环次数、Mg2+浓度、dNTPs浓度和引物浓度分别为56℃、30个循环、1.6 mmol/L、0.2 mmol/L和0.3μmol/L.特异性试验表明,仅铜绿假单胞菌中可扩增出目的片段,而多杀性巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌中均未扩增出相应片段.敏感性试验结果表明,本方法可检测到最低10 pg/μL的铜绿假单胞菌基因组DNA以及100 CFU/mL的病原菌.
关键词：铜绿假单胞菌flgE基因PCR检测方法
分类号：S855.1(动物医学（兽医学）)
资助基金：河南科技大学SRTP项目(2019178)
论文发表日期：2020-03-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1-6 )
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