山羊痘病毒SS株5个ANK基因缺失的重组病毒构建
杨勇飞1
张成1
张雪萍2
童剑军1
高娜1
李有文1
1.塔里木大学动物科学学院,新疆阿拉尔843300;新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室,新疆阿拉尔8433002.新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室,新疆阿拉尔843300;塔里木大学生命科学学院,新疆阿拉尔843300
摘要：为研究锚定蛋白基因(Ankyrin,ANK)对山羊痘病毒的影响,试验采用融合PCR和Overlap PCR技术扩增山羊痘病毒SS株5个ANK基因(ANK010、ANK138、ANK 140、ANK141.2和ANK145)两端侧翼序列和绿色荧光蛋白(GFP)基因,并将其产物连接Trans1-T 1载体构建ANK缺失的转移载体,经过菌液PCR以及质粒双酶切鉴定,阳性重组质粒用Lip 2000转染至已经感染羊痘病毒SS株的羊睾丸原代细胞,依报告基因GFP的表达情况在荧光显微镜下筛选目的基因缺失的重组病毒,同时设立不感染病毒的对照.结果 表明:通过融合PCR方法成功扩增山羊痘病毒SS株ANK基因010和138的两端侧翼序列及GFP基因片段,大小约1 200 bp;通过Overlap PCR方法成功得到ANK基因140、141.2和145基因的侧翼及GFP基因片段,大小约900 bp,与理论相符.研究成功构建了基因缺失转移载体,将其转染感染SS病毒的细胞中,5个ANK基因缺失的表达载体均可见绿色荧光斑点,说明得到各自基因缺失的重组羊痘病毒.
关键词：羊痘病毒GFP基因缺失融合PCR重组病毒Overlap PCR
分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)
资助基金：国家自然科学基金(31760741)国家自然科学基金(31360616)
论文发表日期：2021-01-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 58-62 )
英文信息