铜绿假单胞菌oprD基因的克隆、表达与纯化
翟文汉
宫强
李雅静
河南科技大学,河南洛阳471023
摘要：试验研究铜绿假单胞菌外膜蛋白编码基因oprD在大肠杆菌中的克隆及异源表达与纯化.试验根据GenBank中已发表的铜绿假单胞菌oprD基因序列,设计合成了一对特异性引物,由铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增获得了该目的 基因,随后将其克隆于原核表达载体pET32a中,转化入大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并优化了表达条件,同时对表达的蛋白进行纯化.结果 显示,试验成功构建了重组载体pET32a-oprD,oprD与组氨酸(His)标签形成的融合蛋白约为65 kD.最佳表达条件为菌液培养5h时加入0.7 mmol/L的IPTG,37 ℃下诱导4.5 h,纯化的蛋白经SDS-PAGE分析获得了较高纯度的OPRD重组蛋白.研究结果可以为铜绿假单胞菌OPRD蛋白功能研究及其相关诊断试剂和疫苗的研制提供参考.
关键词：铜绿假单胞菌oprD基因表达纯化
分类号：S855.1(动物医学（兽医学）)
资助基金：河南省自然科学基金(162300410068)
论文发表日期：2021-09-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 1-4 )
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