马疱疹病毒1型ORF2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
杨贤斌
吴桂灵
撒瑞雪
杨凯舒
张嗣玉
齐晋卫
李银涛
刘建华
新疆农业大学动物医学学院,新疆 乌鲁木齐 830000;新疆草食动物新药研究与创制重点实验室,新疆 乌鲁木齐 830052
摘要：研究旨在克隆马疱疹病毒1型(EHV-1)ORF2基因,通过大肠杆菌原核表达系统获得ORF2蛋白,制备多克隆抗体.根据EHV-1 YM2019株全基因组序列(GenBank:MT063054)设计1对引物,将ORF2基因克隆至pET-28a-ORF2原核表达载体中,通过Transetta(DE3)感受态细胞,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达ORF2蛋白,使用Ni-NTA琼脂糖纯化树脂纯化,免疫BALB/c小鼠,检测多克隆抗体的效价和特异性.结果显示:ORF2基因成功克隆至原核表达载体pET-28a中,并通过大肠杆菌表达系统得到ORF2蛋白,大小约为38 ku,以包涵体的形式存在.通过Ni-NTA纯化树脂获得纯度较高的重组蛋白,能够与EHV-1阳性血清特异性结合;间接ELISA方法检测多克隆抗体的效价为1:64 000,RK-13表达的ORF2蛋白可被多克隆抗体能特异性识别.研究表明,大肠杆菌表达的ORF2重组蛋白具有良好反应原性,ORF2蛋白制备的多克隆抗体效价高、特异性强,可为ORF2蛋白的生物学功能和基因缺失疫苗的研究奠定基础.
关键词：马疱疹病毒1型ORF2蛋白原核表达多克隆抗体制备
分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)
资助基金：中央引导地方科技发展专项资金项目(ZYYD2023C03)新疆农业大学大学生创新训练计划项目(S202210758063)
论文发表日期：2024-06-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 1-5 )
英文信息