发热伴血小板减少综合征病毒核蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
陆桦葆
程子文
胡瀛方
王俊竹
张晓茹
孙荟迪
王大为
杨宝玲
锦州医科大学,辽宁 锦州 121000
摘要：研究旨在以严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)的核蛋白(NP)为对象,表达SFTSV-NP重组蛋白并免疫小鼠,制备多克隆抗体,为SFTSV诊断试剂的研发奠定基础.试验扩增SFTSV-NP蛋白并连入pET-28a原核表达质粒,通过优化条件进行体外蛋白质的表达与纯化;同时免疫小鼠进行特异性抗体的制备,并对免疫所得抗体的效价进行ELISA检测,利用Western blot和IFA对抗体特异性进行分析.结果显示,试验成功扩增了长度为738 bp的SFTSV-NP蛋白,经菌落PCR和测序验证成功将NP片段连入pET-28a原核表达质粒;通过对表达条件的优化,得出培养温度为28℃、IPTG浓度为0.1 mmol/L时蛋白表达量最大(27 kDa),并进行大量的表达纯化;免疫小鼠所得的特异性抗体效价经ELISA检测符合后续试验要求,且经Western blot和IFA验证后特异性良好.研究表明,试验成功纯化了SFTSV-NP蛋白并制备了多克隆抗体,为后续SFTSV的监测以及功能的深入研究奠定了基础.
关键词：发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)核蛋白原核表达多克隆抗体
分类号：S855.9+9(动物医学（兽医学）)
资助基金：锦州医科大学大学生创新创业训练计划项目(X202210160050)锦州医科大学大学生创新创业训练计划项目(X202210160022)辽宁省教育厅基本科研项目(JYTQN2023433)辽宁省教育厅基本科研项目(JYTQN2023435)锦州医科大学-博泽青年科技人才托举项目(JYQT202303)锦州医科大学-博泽青年科技人才托举项目(JYBZQT2109)辽宁省自然科学基金博士科研启动基金计划项目(2022-BS-325)辽宁省自然科学基金博士科研启动基金计划项目(2022-BS-323)
论文发表日期：2025-03-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 26-31 )
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