HEV/HAV两联装甲RNA质控样品的研制及应用性能评价
杨书仁
朱志梅
许艺凡
李慧
王术德
高慎阳
锦州医科大学畜牧兽医学院,辽宁省畜产品质量与安全工程重点实验室,辽宁 锦州 121001
摘要：试验旨在研制一种安全、稳定性强的戊型肝炎(HEV)和甲型肝炎(HAV)两联装甲RNA阳性质控品.利用装甲RNA技术,设计将HEV与HAV标准检测靶基因序列串联合成MS2-HE-AV基因片段,将其克隆到pET-28b载体中构建重组质粒pET-28b-MS2-HE-AV608,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导原核表达、纯化制备HE-AV二联病毒样颗粒(VLPs),并对其稳定性、回收率进行验证以评价其实际应用性能.结果显示,试验成功构建包含MS2外壳蛋白和外源靶基因的重组载体,目的蛋白高效表达,电镜下可见直径约为27 nm的VLPs.该VLPs可耐受全能核酸酶降解作用.VLPs中HEV和HAV检测靶标定值结果分别为1.88×109、1.17×109 copies/μL.该VLPs在4℃条件下至少可保存21 d,符合国家标准中对于VLPs保存期的基本规定.实际样品检测结果显示,当人工污染样品的VLPs浓度稀释为1 000、10 000倍时,4种样品基质中装甲RNA回收率均大于1%.研究表明,HE-AV两联VLPs能够有效抵抗全能核酸酶的降解作用、热稳定性好、适用性强,可作为HEV和HAV核酸检测的阳性质控品全程监控病毒核酸检测过程.
关键词：戊型肝炎病毒甲型肝炎病毒阳性质控品装甲RNA
分类号：S855.4(动物医学（兽医学）)
资助基金：辽宁省教育厅面上项目(JYTMS20231735)辽宁省科学技术计划项目(2023JH110200006)
论文发表日期：2025-05-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：7( 1-7 )
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