中华蜜蜂Peter Pan蛋白的原核表达载体构建
仇会桐1
刘宇明1
白桦1
程玉1
李明1
费东亮1
刘艳霞2
马鸣潇1
1.锦州医科大学畜牧兽医学院,辽宁 锦州 1210002.辽宁益康生物股份有限公司,辽宁 辽阳 111000
摘要：试验旨在探究彼得潘(Peter Pan,PPAN)在中华蜜蜂幼虫中的功能.试验通过构建原核表达质粒并诱导蛋白表达,得到PPAN原核蛋白;借助PCR技术对PPAN基因进行扩增,并将扩增产物插入到原核表达载体pGEX-4T-1,成功构建重组质粒pGEX-4T-1-PPAN并转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中.通过SDS-PAGE分析优化目的蛋白诱导表达条件,并进行Western-blot鉴定.结果显示,在大肠杆菌中,PPAN蛋白以包涵体形式成功表达,蛋白的最佳诱导条件为诱导温度28℃,诱导时间8 h,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度0.5 mmol/L,扩增得到的PPAN基因片段大小为1 146 bp,编码蛋白的分子量为70.6 kDa.研究表明,试验成功构建PPAN蛋白的原核表达载体,并实现其在大肠杆菌中的诱导表达,为后续探究PPAN蛋白对中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)复制的影响奠定了一定基础.
关键词：中华蜜蜂幼虫原核表达彼得潘(PPAN)
分类号：S895.1(养蜂、益虫饲养)
资助基金：国家自然科学基金(31772760)
论文发表日期：2025-06-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 7-11 )
英文信息