利用CRISPR/Cas9技术构建ST细胞Beclin1基因敲除稳定细胞株
俞晖
陈海恩
苏绮玲
黄怡丹
吴江
康恺
广东海洋大学滨海农业学院,广东 湛江 524088
摘要：试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除猪睾丸(swine testis,ST)细胞系Beclin1基因,构建自噬基因敲除细胞株,为后续研究自噬在ST细胞增殖过程中与其他生理功能之间的关系奠定基础.根据CRISPR/Cas9靶点设计规则,设计特异性靶向Beclin1基因第1个外显子相关序列的sgRNA,构建pLV3-U6-MCS-sgRNA重组质粒.测序鉴定后将重组质粒转染至ST细胞中,使用嘌呤霉素筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,采用Western blot法鉴定细胞Beclin1敲除效果.结果显示,经过CRISPR/Cas9系统处理后,筛选获得了ST敲除Beclin1稳定细胞株.与原始ST细胞株相比,B组敲除Beclin1稳定细胞株中未检出Beclin1蛋白质的表达.研究表明,试验成功构建了Beclin1敲除的ST细胞株,为Beclin1功能研究提供了有力工具.
关键词：CRISPR/Cas9Beclin1ST细胞基因敲除
分类号：S858.28(动物医学（兽医学）)
资助基金：广东省自然科学基金(2020A1515110362)广东省科技厅海外名师项目(K23438)湛江市科学技术局海洋生物方向基金(2021E05028)
论文发表日期：2025-06-15
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 18-22 )
英文信息