基于RAA-CRISPR/Cas13a的空肠弯曲杆菌检测方法的建立
罗如杏1
梁子立1
何琪富2
张炎1
张志东1
郭紫晶1
1.西南民族大学畜牧兽医学院,四川 成都 6100412.成都市武侯区人民医院,四川 成都 610041;成都市武侯区妇幼保健院,四川 成都 610041
摘要：研究旨在将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a)技术结合,建立基于RAA-CRISPR/cas13a的空肠弯曲杆菌检测方法.针对空肠弯曲杆菌的保守基因设计特异性的CRISPR RNA序列和RAA引物,通过RAA扩增后进行CRISPR-Cas13a的荧光检测,优化检测体系中主要成分,之后对优化后的检测方法的特异性、敏感性、重复性进行评估,并通过检测临床样品与现有的实时荧光PCR(qPCR)检测方法进行比较.结果显示,优化后的检测方法对多种食源性致病菌无交叉反应,具有良好的特异性;检测下限低至9.3 copies/μL,具有较高的灵敏度.组内和组间的变异系数分别低于4.15%和3.51%,具有良好的重复性.该方法对40份猪腹泻粪便样品的检出率为30%(12/40),高于qPCR检测方法(20%,8/40),检测的12份阳性样品经测序进一步确认为空肠弯曲杆菌,证明该方法检测结果的准确性.研究表明,试验建立了灵敏高、特异性强的检测空肠弯曲杆菌的RAA-CRISPR/Cas13a方法,为空肠弯曲杆菌的检测提供了新技术,在食源性疾病监测和动物疫病防控领域展现出良好的应用前景.
关键词：空肠弯曲杆菌RAACRISPR-Cas13a
分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)
资助基金：大学生创新创业训练计划项目(S202410656086)四川省科技计划资助-四川省自然科学基金青年基金项目(2024NSFSC1274)西南民族大学科研启动金资助项目(RQD2023001)
论文发表日期：2025-08-15
在线出版日期：2025-09-22（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 14-19 )
英文信息