人N端脂多糖结合蛋白基因在sf21昆虫细胞中的表达
王晓东1
刘友生1
葛晓冬1
张杰2
高波2
薛沿宁2
1.第三军医大学西南医院病理学研究所,2.军事医学科学院基础研究所,
摘要：目的表达重组人N端脂多糖结合蛋白(truncated lipopolysaccharide binding protein,tLBP).方法通过病毒鉴定、SDS-PAGE、western blot、毛细管电泳、体外结合实验、细胞活性实验对重组病毒及重组蛋白tLBP的分子量、纯度和生物学活性进行分析.结果重组病毒空斑分析确定MOI(multiplicity of infection)为8～10,SDS-PAGE显示感染时间65～72 h为最佳表达条件;凝胶扫描显示特异表达蛋白占总产物的9.8%,纯化蛋白的分子量约27 000 u,纯度达95%以上;毛细管电泳显示表达产物呈单一峰型;Lowry法测定约1 L上清液可获9 mg 纯化蛋白;Western blot间接显示表达产物反应带与预期值相符;酶联体外结合实验证实该蛋白可特异结合LPS.应用U937细胞,经LPS(1 ng/mL)刺激与LPS(1 ng/mL)刺激加纯化蛋白(1 μg/mL)对比观察发现,加入纯化蛋白后不同时相点TNF-α含量均有所下降.结论人N端脂多糖结合蛋白在sf21昆虫细胞中获得高效表达,并观察到它在体外具有结合或中和内毒素的活性作用.
关键词：N端脂多糖结合蛋白杆状病毒昆虫细胞基因表达
分类号：R34(基础医学)R631+.2(外科感染)
资助基金：国家自然科学基金(39970757)军队医药卫生科研项目(98M091)
论文发表日期：2001-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 417-420 )
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