小鼠IL-18 cDNA克隆及在H22肝癌细胞中的初步表达
周虎
陆梁
裴冬生
赵惠仁
1.徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,江苏,徐州,2210022.徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,江苏,徐州,2210023.徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,江苏,徐州,2210024.徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心,江苏,徐州,221002
摘要：目的构建小鼠白细胞介素-18(mIL-18)逆转录病毒载体,实现mIL-18在小鼠H22肝癌细胞中表达.方法用RT-PCR方法从小鼠肝脏细胞中扩增出mIL-18 cDNA,克隆到载体pBluscript中,测序后亚克隆到逆转录病毒载体pLNCX中.pLNCX/mIL-18重组子用脂质体介导的方法转染PA317包装细胞,用400μg/mL G418进行筛选.挑取筛选得到的阳性克隆扩大培养,取上清感染NIH3T3细胞和H22肝癌细胞.用感染后的H22细胞上清诱导小鼠脾细胞IFN-γ生成能力来检测H22细胞分泌mIL-18的情况.结果用NIH3T3细胞测得病毒滴度为1.5×105克隆形成单位CFU/mL,转染后的H22肝癌细胞上清对小鼠脾细胞具有显著的IFN-γ诱生作用.结论pLNCX/mIL-18重组子构建成功,初步证明转染后的H22肝癌细胞能够表达IL-18.
关键词：白细胞介素-18逆转录病毒载体克隆
分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)
论文发表日期：2002-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 221-224 )
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