huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白的表达及活性测定
孙强明
戴长柏
李洪钊
丁云菲
马雁冰
刘红岩
徐维明
1.中国协和医科大学中国医学科学院医学生物学研究所分子生物室,云南,昆明,6501182.中国协和医科大学中国医学科学院医学生物学研究所分子生物室,云南,昆明,6501183.中国协和医科大学中国医学科学院医学生物学研究所分子生物室,云南,昆明,6501184.中国协和医科大学中国医学科学院医学生物学研究所分子生物室,云南,昆明,6501185.中国协和医科大学中国医学科学院医学生物学研究所分子生物室,云南,昆明,6501186.中国协和医科大学中国医学科学院医学生物学研究所分子生物室,云南,昆明,6501187.中国协和医科大学中国医学科学院医学生物学研究所分子生物室,云南,昆明,650118
摘要：目的构建及表达具有huIL-6和huGM-CSF双重生物学活性的huIL-6-GM-CSF(9-127) 融合蛋白分子.方法应用PCR技术对huIL-6和huGM-CSF的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3, 克隆PCR产物,并构建成pBV220-IL-6-GM-CSF(9-127)表达质粒,将表达质粒导入E.coli DH5α中,诱导表达融合蛋白.通过Q Sepharose H.P. 离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白.使用MTT法测量其huIL-6和huGM-CSF生物学活性.结果 pUC18- IL-6-GM-CSF(9-127)的序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coli DH5α中得到高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在.通过Q Sepharose H.P.离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得目的蛋白,其纯度达到96%以上.融合蛋白具有huIL-6和huGM-CSF的双重生物学活性,其促进huIL-6依赖细胞株B9和huGM-CSF依赖细胞株TF-1增殖的比活性分别为2.86×107 U/mg和3.33×108 U/mg.结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的huIL-6-GM-CSF(9-127)融合蛋白.
关键词：IL-6GM-CSF融合蛋白克隆基因表达
分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)
资助基金：云南省自然科学基金(2001C0031Q)
论文发表日期：2002-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 253-257 )
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