超抗原SEA的基因克隆、原核表达与鉴定
叶菁1
隋延仿1
李增山1
陈广生1
张秀敏1
曹云新2
1.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100322.第四军医大学基础部免疫学教研室,陕西,西安,710032
摘要：目的构建pRSET-SEA重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导表达超抗原葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA),进行分离、纯化及western blot鉴定.方法采用PCR技术,从产SEA的葡萄球菌标准菌株FRI 100基因组DNA中获得SEA全长序列,克隆入pUC19中,进行测序,构建pRSET-SEA表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS.通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,分离、纯化及western blot鉴定.结果 PCR获得超抗原SEA基因片段,DNA测序结果与文献报道一致;构建了pRSET-SEA表达质粒,并成功地诱导表达出32000 u的蛋白;Western blot鉴定所得蛋白能够与SEA单克隆抗体特异性结合.结论本研究成功地克隆了SEA全长,并进行了原核表达和分离、纯化,获得了SEA蛋白.
关键词：葡萄球菌肠毒素A超抗原原核表达PCR
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(39770827)军队医药卫生科研项目(01Z084)
论文发表日期：2002-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 418-420 )
英文信息