抗人结肠癌单抗MC5的功能性ScFv在大肠杆菌中的可溶性表达
何凤田
郑英如
高会广
陈姗
李蓉芬
江渝
彭家和
钟小林
1.第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆 4000382.第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆 4000383.第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆 4000384.第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆 4000385.第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆 4000386.第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆 4000387.第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆 4000388.第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆 400038
摘要：目的制备抗人结肠癌单抗MC5的具功能活性的可溶性单链可变区片段(ScFv).方法从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA,RT-PCR分别扩增抗体质量、轻链可变区基因(VH和VL DNA),经linker DNA连接形成ScFv DNA.将ScFv DNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,转化菌经辅助噬菌体M13KO7感染后,获得重组噬菌体.以高表达MC5结合抗原的人结肠癌细胞系SW480对重组噬菌体进行 2轮筛选后,经ELISA筛选呈现抗体ScFv片段的噬菌体单克隆.取2个强阳性克隆的噬菌体感染大肠杆菌HB2151,用于表达可溶性ScFv.经点印迹和Western印迹对可溶性ScFv进行鉴定,经ELISA检测可溶性ScFv的抗原结合活性.结竦玫腣H、VL和ScFv DNA分别约为340、320和750 bp.对重组噬菌体经2轮亲和筛选后,经ELISA从25个克隆中筛检出10个抗原阳性克隆.源于2个强阳性克隆的可溶性ScFv的分子质量为32 000 u,且浓集于细菌周质腔中,可溶性ScFv具有抗原结合活性,其结合位点与亲本单抗MC5相同.结论针对MC5的具功能活性的可溶性ScFv的成功制备,为人结肠癌的体外(乃至体内)研究提供了新的靶向载体分子.
关键词：ScFv抗体结肠癌噬菌体呈现原核表达
分类号：R735.303(消化系肿瘤)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：6( 1-6 )
英文信息