HIV-1 膜蛋白基因片段杆状病毒转移载体克隆及重组体的构建
胡波1
李朝霞1
周宇麒2
梁敏坚1
罗敏琪1
李林1
1.中山大学附属第三医院检验科,广东,广州,5106302.中山大学附属第三医院内科,广东,广州,510630
摘要：目的构建编码HIV-1外膜糖蛋白的gp120和gp41基因杆状病毒转移载体,并在昆虫细胞中表达gp120和gp41重组蛋白.方法从HIV-1基因克隆PNL4-3(NY5/LAV)中应用聚合链反应扩增目的基因gp120和gp41,克隆到PGEM-T载体中 ,限制性内切酶酶切、DNA序列分析鉴定目的基因,再经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后定向克隆到杆状病毒转移载体PACSecG2T中,再次测序鉴定.通过在sf9昆虫细胞中同源重组、空斑筛选、病毒鉴定、SDS-PAGE、Western-blot对重组病毒和重组蛋白进行分析.结果限制性内切酶酶切和DNA序列分析表明,gp120和gp41 正确克隆到杆状病毒转移载体PACSecG2T中;SDS-PAGE和Western-blot结果表明在昆虫细胞中成功表达了HIV外膜糖蛋白gp120和gp41.结论成功构建了PACSecG2T-gp120和PACSecG2T-gp4 1杆状病毒转移载体,并在杆状病毒-昆虫细胞表达系统中表达了HIV-1 gp120 和gp41重组蛋白,Wes-tern-blot证明具有较好的免疫原性.
关键词：杆状病毒HIV-1gp120gp41昆虫细胞
分类号：R512.91(传染病)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 127-131 )
英文信息