重组人BAFF112-285的制备及活性分析
何凤田1
郑英如2
高会广1
李蓉芬1
郑汉其3
吉青1
江渝1
陈敏1
钟小林1
1.第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆,4000382.第三军医大学大坪医院妇产科,重庆,4000423.香港中文大学生物化学系,香港
摘要：目的制备具有功能活性的重组人TNF家族的B细胞激活因子(B cell activating factor belonging to the TNF fa-mily,BAFF)胞外区112～285氨基酸残基段(rhBAFF112-285),为BAFF的深入研究奠定基础.方法提取人HL-60细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人BAFF胞外区112～285氨基酸残基(BAFF112-285)的cDNA,行序列测定后,构建于原核表达载体pQE-80L并转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达rhBAFF112-285,Ni2+-NTA层析纯化,进而经3H-TdR掺入实验检测其免疫学活性.结果RT-PCR扩增得到了 525bp的DNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF112-285的cDNA序列一致,该胞外区片段在大肠杆菌中获得了高效表达,表达水平达细菌总蛋白的45.7%,经纯化后纯度可达98.4%,活性检测证实其能明显刺激外周血淋巴细胞活化.结论利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF112-285,所获纯化产物具有生物学活性,所获结果为进一步研究创造了条件.
关键词：TNF家族的B细胞激活因子(BAFF)cDNA克隆原核表达淋巴细胞活化
分类号：R730.3(一般性问题)
资助基金：国家自然科学基金(30271228)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 178-182 )
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