κ、λ轻链C区基因的克隆与表达
陆慧琦
韩焕兴
叶伟民
杨丹榕
1.第二军医大学附属长征医院临床免疫中心,上海,2000032.第二军医大学附属长征医院临床免疫中心,上海,2000033.第二军医大学附属长征医院临床免疫中心,上海,2000034.第二军医大学附属长征医院临床免疫中心,上海,200003
摘要：目的利用pBAd/gⅢA表达载体和大肠杆菌Top 10克隆和表达κ、λ轻链C区基因片段,探索生物工程技术制备小分子抗原的可行性.方法经RT-PCR从正常人的外周血淋巴细胞mRNA中扩增出κ、λ轻链恒定区基因,限制性双酶切后分别克隆到同样酶切的pBAd/gⅢA质粒中,转化大肠杆菌.酶切鉴定与PCR法筛选出阳性克隆菌株,经Arabinose诱导表达出κ、λ轻链片段.Ni2+-NTA亲和层析纯化后,以150 mg/mL SDS-PAGE与Western blot鉴定纯化产物,并测定蛋白的相对浓度.结果SDS-PAGE与Western blot结果显示,纯化后的产物在Mr16 000处呈致密的单一条带,与克隆基因表达产物的相对分子质量一致,该带经HRP标记的羊抗人IgG Fab抗体证实为抗体片段成分.结论κ、λ轻链C区基因的pBAd/gⅢA表达在技术上是可行的,该原核系统表达的片段具抗原性,为后续的开发应用打下了基础.
关键词：pBAd/gⅢAκ基因序列λ基因序列表达纯化免疫印迹
分类号：R392.116(医学免疫学)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 394-396 )
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