肿瘤坏死因子新型免疫抑制剂的构建、表达和鉴定
韩苇
赵宁
颜真
石继宏
张英起
1.第四军医大学生物技术中心,陕西,西安,7100322.第四军医大学生物技术中心,陕西,西安,7100323.第四军医大学生物技术中心,陕西,西安,7100324.第四军医大学生物技术中心,陕西,西安,7100325.第四军医大学生物技术中心,陕西,西安,710032
摘要：目的用鸡卵清溶菌酶(Hen egg-white lysozyme,HEL)T辅助细胞表位序列替换hTNF-α3'末端序列,构建和表达hTNF-α新型免疫抑制剂.方法将重组的hTNF-α HEL克隆、表达、纯化后进行初步的生物学活性鉴定.结果DNA测序分析表明,重组的hTNF-α HEL3'末端序列与设计序列完全相同.将其插入pBV220表达载体中,重组菌经42℃诱导4 h做SDS-PAGE分析,结果显示该免疫抑制剂获得了表达,Mr为17 000,其表达量为菌体总蛋白量的30%.Western blot结果证实,该表达蛋白可与抗TNF-α抗体产生免疫反应.对该表达蛋白进行了阴离子交换柱纯化,获得的重组蛋白的纯度可达95%以上.对该蛋白的体外杀伤活性检测表明,该蛋白已完全丧失了TNF-α的体外杀伤活性.结论上述实验结果证明,TNF-α免疫抑制剂的构建获得了成功,该免疫抑制剂既保持了与TNF-α抗体结合的能力又失去了TNF-α的杀伤活性,为其下一步治疗作用的研究奠定了基础.
关键词：TNF-α鸡卵清溶菌酶T辅助细胞表位序列免疫抑制剂
分类号：R392(医学免疫学)
论文发表日期：2003-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 397-400,405 )
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