肿瘤抗原MAGE-3基因的克隆与原核表达
马加海
隋延仿
叶菁
黄亚渝
陈广生
张秀敏
1.第四军医大学基础部病理学教研室,西安,7100322.第四军医大学基础部病理学教研室,西安,7100323.第四军医大学基础部病理学教研室,西安,7100324.第四军医大学基础部病理学教研室,西安,7100325.第四军医大学基础部病理学教研室,西安,7100326.第四军医大学基础部病理学教研室,西安,710032
摘要：目的克隆肿瘤抗原MAGE-3基因3'端657 bp片段,对其编码的蛋白羧基端97～314aa进行原核表达.方法从含人MAGE-3基因全长cDNA的pUC19/MAGE-3质粒中经聚合酶链式反应(PCR)扩增3'端657 bp片段,并克隆入pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达质粒pGEX/MAGE-3,对含有该质粒的大肠杆菌DH5α进行诱导表达.结果从pUC19/MAGE-3重组质粒中扩增获得一条约660 bp的条带,测序结果表明与GenBank公布的MAGE-3序列一致,成功地构建了pGEX/MAGE-3原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌DH5α经异丙基-β-D-半乳糖苷(Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导后表达Mr为54 000 的谷胱甘肽巯基转移酶 (Glutathione S-transferse,GST)融合蛋白.表达的融合蛋白约占菌体蛋白总量的28%.结论成功地构建了pGEX/MAGE-3原核表达质粒,获得了MAGE-3蛋白羧基端97～314aa融合蛋白,为该蛋白应用于肿瘤免疫治疗奠定了基础.
关键词：基因/MEGE-3原核表达聚合酶链式反应
分类号：R735(消化系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(30271464)军队医药卫生科研项目(01Z084)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 10-12 )
英文信息