重组MHC I类分子Kb-EGFP分子的构建及表达
姜曼
万瑛
周镜然
邹丽云
韩俊峰
吴玉章
1.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,4000382.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,4000383.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,4000384.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,4000385.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,4000386.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,400038
摘要：目的构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子Kb(Kb-EGFP融合蛋白),并在哺乳动物细胞中获得功能性表达.方法RT-PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子Kb cDNA,克隆入真核表达载体pGFP-N1中EGFP分子的上游,脂质体转染COS-7细胞,G418加压筛选获得抗性重组细胞.荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况.结果分子克隆的方法获得了预期的重组质粒,质粒经DNA序列测定证实阅读框无误,转染COS-7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光,特征性地分布于细胞质膜,及核周、膜下的囊泡结构中.结论所构建的Kb-EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布,提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征,为进一步深入研究MHCⅠ类分子胞内动态分布及分子功能提供了良好的细胞和分子模型.
关键词：MHCⅠ类分子绿色荧光蛋白融合蛋白重组表达
分类号：R392.11(医学免疫学)R392.33(医学免疫学)
资助基金：国家重点基础研究发展计划(973计划)(2001CB510001)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 100-102,109 )
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