人源噬菌体Fab抗体库构建过程中引物的优化和初步鉴定
包国强1
马庆久1
邢金良2
杨向民2
陈志南2
1.第四军医大学唐都医院普通外科,陕西,西安,7100382.第四军医大学基础部细胞工程研究中心,陕西,西安,710032
摘要：目的优化设计一套引物,扩增全套人抗体Fd片段和L链基因,改善扩增效率,益于人源噬菌体抗体库的构建.方法根据V-BASE数据库提供的人抗体可变区胚系基因,在其家族分类基础上,根据FR1区5'端保守序列重新分组,设计特异性的5'端扩增引物.同时对设计引物的匹配情况进行分析,并应用PCR扩增和测序反应对其扩增效果进行鉴定. 结果 Fd链5'端扩增引物有5条,κ轻链有6条5'端扩增引物,而λ轻链5'和3'扩增引物有10条.分析表明,人抗体可变区胚系基因与5'引物有较好的匹配率,数目较少,匹配率较高.PCR结果显示,全部的重链及轻链引物对均能高效扩增出特异性较高的目的片段.测序结果表明PCR扩增产物具有较好的亚类和可变区家族分布.结论优化了一套扩增全套人抗体Fd片段和L基因的引物,为人源噬菌体抗体库的构建奠定了良好的基础.
关键词：抗体库Fab引物优化
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30070842)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 220-223 )
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