结核分枝杆菌Ag85B/GST融合蛋白表达载体构建及在大肠杆菌中的表达
杨登科
靳风烁
张勇
江军
闫天中
1.第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,4000422.第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,4000423.第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,4000424.第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,4000425.第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科,重庆,400042
摘要：目的构建结核分枝杆菌Ag85B/GST融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达.方法以质粒pUC18/Ag85B为模板,用PCR法扩增结核杆菌Ag85B基因,扩增的Ag85B上游含有EcoR Ⅰ酶切位点,下游含有SaLⅠ酶切位点;将Ag85B基因定向插入质粒pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-Ag85B并转化E.coli BL21,筛选阳性重组子,限制性内切酶切鉴定和DNA序列测定,异丙基硫代半乳糖苷(IPG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定结果.结果成功构建原核表达质粒pGEX-Ag85B并表达出MX约56000大小的Ag85B/GST融合蛋白,表达量占总菌体的30%.结论为进一步进行纯化Ag85B蛋白和研究其在膀胱肿瘤治疗中的作用奠定了基础.
关键词：结核杆菌Ag85B质粒原核表达
分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 313-316 )
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