HLA-C和HLA-G基因真核细胞双表达载体的克隆及鉴定分析
张磊
杨珏琴
姚芳娟
许玲娣
范丽安
1.上海市免疫学研究所,上海第二医科大学,上海,2000252.上海市免疫学研究所,上海第二医科大学,上海,2000253.上海市免疫学研究所,上海第二医科大学,上海,2000254.上海市免疫学研究所,上海第二医科大学,上海,2000255.上海市免疫学研究所,上海第二医科大学,上海,200025
摘要：目的构建人HLA-C和HLA-G基因真核细胞双表达载体.方法用RT-PCR从孕妇蜕膜组织有核细胞总mRNA中逆转录扩增全长HLA-C和HLA-G cDNA,首先将HLA-G经BamHⅠ和Cla Ⅰ双酶切,HLA-C经EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切后,分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2的多克隆位点1(mcs1)和2(mcs2)中,然后经酶切和测序鉴定,确定已建立pVITRO2的单表达质粒pVITRO2-HLA-G和pVITRO2-HLA-C,再将HLA-C cDNA经EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切,定向插入单表达质粒pVITRO2-HLA-G的多克隆位点2(mcs2)中,经PCR反应初筛,再经双酶切鉴定.结果限制性内切酶和测序分析表明已成功构建了HLA-Cw*0103和HLA-G*0101的单表达质粒pVITRO2-HLA-C和pVITRO2-HLA-G以及双表达质粒pVITRO2-HLA-CG.结论本研究成功构建了真核细胞双顺反子载体pVITRO2的双表达质粒pVITRO2-HLA-CG,以及单表达质粒pVITRO2-HLA-C和pVITRO2-HLA-G.
关键词：HLA-CHLA-G双顺反子载体pVITRO2双表达质粒
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(30070784)国家自然科学基金(30371350)上海市科委资助项目(02DJ14054)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 334-337,342 )
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