MAGE-3基因真核表达载体构建及在小鼠黑色素瘤细胞中的表达
马加海
隋延仿
陈广生
叶菁
黄亚渝
曲萍
张秀敏
1.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100322.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100323.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100324.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100325.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100326.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100327.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710032
摘要：目的扩增人黑色素瘤抗原-3(Melanoma antigen 3,MAGE-3)基因,构建真核表达载体,并在小鼠黑色素细胞瘤B16中进行表达.方法采用PCR扩增MAGE-3基因,连接到真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3,脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞.G418筛选阳性克隆,荧光显微镜和RT-PCR分别检测阳性克隆中增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的表达和MAGE-3 mRNA的表达.结果从pUC19/MAGE-3重组质粒中扩增获得一条约950bp的片段,成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3,转染B16细胞后筛选得到阳性克隆,可见融合蛋白表达产生明亮的绿色荧光,RT-PCR检测到MAGE-3 mRNA的表达.结论成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MAGE-3,获得了稳定表达该载体的小鼠黑色素瘤B16细胞系,为研究MAGE-3在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了基础.
关键词：黑色素瘤抗原3基因转染绿色荧光蛋白基因表达
分类号：R735(消化系肿瘤)
资助基金：国家自然科学基金(30271464)军队医药卫生科研项目(012084)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 350-352,356 )
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