超抗原SEA(D227A)的构建及其免疫活性鉴定
宋宏萍
隋延仿
叶菁
李增山
陈广生
张秀敏
1.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100322.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100323.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100324.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100325.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,7100326.第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710032
摘要：目的构建SEA(D227A)基因的原核表达载体,并进行表达、分离纯化与免疫活性鉴定.方法采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因,通过下游引物上的点突变,使SEA基因第680位碱基由A突变为C,致使SEA成熟蛋白的第227位氨基酸残基由天冬氨酸(GAT)突变为丙氨酸(GCT),构建pGEX-SEA(D227A)重组表达质粒,在大肠杆菌DH5α中原核表达,再通过淋巴细胞增殖实验对其免疫活性进行测定.结果构建的SEA(D227A)基因经测序证实与设计的序列一致;成功地构建pGEX-SEA(D227A)重组表达质粒,转化感受态大肠杆菌DH5α,通过IFTG诱导、GSTrap FF柱分离纯化及凝血酶切除GST后,得到Mr为27 000的目的蛋白.淋巴细胞增殖实验显示,100 ng/mL重组SEA(D227A)可明显刺激淋巴细胞增殖.结论成功地构建了SEA(D227A)基因原核表达载体,并在大肠杆菌中得到高效表达,所得重组SEA(D227A)能够刺激淋巴细胞增殖,但作用与野生型SEA相比较温和.该结果为寻找有效、毒副作用低的超抗原提供了线索.
关键词：葡萄球菌肠毒素A超抗原原核表达点突变
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：国家自然科学基金(39770827)军队医药卫生科研项目(01Z084)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 357-360 )
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