粉尘螨Ⅰ类抗原cDNA的克隆表达和初步鉴定
杨庆贵
李朝品
1.安徽理工大学医学院病原学与免疫学教研室,安徽,淮南,2320012.安徽理工大学医学院病原学与免疫学教研室,安徽,淮南,232001
摘要：目的构建粉尘螨Ⅰ类抗原(Der f1 )cDNA基因的重组表达质粒,并于E.coli表达.方法用BamHⅠ和SacⅠ从重组质粒pMD-18T-Der f1上切下Der f1基因,插入表达载体pET32a(+)质粒,转化大肠杆菌BL21,在氨苄青霉素阳性的LB平板上筛选阳性重组子,并经双酶切及PCR扩增鉴定.重组质粒pET32a(+)-Der f1转化大肠杆菌,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳和薄层凝胶扫描定量分析.结果对重组质粒进行酶切和PCR鉴定,与预期结果相符,证明已成功构建携带Der f1基因的重组原核表达质粒pET32a(+)-Der f1.核酸序列测定及同源性分析证实所构建的原核表达质粒pET32a(+)-Der f1中所含的Der f1基因与GenBank中的Der f1序列同源性达到99.5%.Der f1基因在大肠杆菌诱导表达后获得Mr约45 000的蛋白,蛋白含量占全菌体蛋白含量的15%.结论成功构建了粉尘螨Ⅰ类抗原cDNA基因的重组表达质粒pET32a(+)-Der f1,并在大肠杆菌中获得高效表达,为获得重组纯化Der f1变应原并用于尘螨变应性疾病的诊治奠定基础.
关键词：粉尘螨抗原cDNA基因重组原核表达
分类号：R384.4(医学寄生虫学)
资助基金：安徽省自然科学基金(03043303)
论文发表日期：2004-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：3( 472-474 )
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