BTLA蛋白胞外区片段的制备及鉴定
毛丽伟
倪兵
姜曼
黎万玲
肖宇
吴玉章
1.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,4000382.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,4000383.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,4000384.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,4000385.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,4000386.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,400038
摘要：目的克隆人的BTLA蛋白分子的基因胞外区片段(Extracellular region of BTLA,exBTLA),并在Flp-In CHO系统表达、纯化,用于单克隆抗体的制备或直接进行功能研究.方法用RT-PCR方法制备exBTLA基因,以哺乳细胞高效表达质粒载体pSec/WG为载体构建重组融合exBTLA-Ig Fc/pSec/WG质粒.重组体经双酶切鉴定后,再通过测序鉴定克隆的正确性.采用脂质体法将重组质粒转染Flp-In CHO细胞,G蛋白亲和层析法纯化蛋白.用Western blotting检测BTLA基因胞外区表达的特异性.结果正确构建了exBTLA/pSec/WG重组质粒,并在转染细胞所分泌的上清液中检测出了蛋白片段的表达.利用亲和层析法成功纯化出特异的exBTLA蛋白.结论成功地构建了exBTLA/pSec/WG重组质粒,纯化出exBTLA蛋白,为下一步mAb制备及其功能研究提供实验依据.
关键词：BTLART-PCR克隆
分类号：R392.11(医学免疫学)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 100-103 )
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