抗β-连环蛋白抗体的制备及其在乳腺癌诊断中的应用
陈晶1
单保恩2
贺占国1
董稚明2
马洪3
1.解放军白求恩国际和平医院检验科,石家庄,0500822.河北医科大学第四医院科研中心,石家庄,0500113.MD Technologies Inc.845 Pheasant Woods Drive Manchester,Mo 63021,USA
摘要：目的制备和纯化兔抗小鼠β-catenin抗体,分析其在乳腺癌细胞和乳腺良、恶性组织中的表达.方法应用重组小鼠β-catenin蛋白,常规免疫雄性新西兰兔制备抗β-catenin抗体,并用盐析法和离子交换层析技术进行纯化,用免疫印迹法(Western blot)检测β-catenin抗体的纯度和特异性以及乳腺癌细胞株MCF-7和T-47D中β-catenin蛋白的表达.用免疫组织化学SP法检测β-catenin在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的不同表达.结果用重组小鼠β-catenin蛋白免疫新西兰兔6周后,应用间接ELISA法检测静脉血中β-catenin抗体效价为1:204 800(A450nm=1.01).将β-catenin经SDS-PAGE分离,可见1条相对分子质量(Mr)为92 000的蛋白条带,与文献报道相符.用抗β-catenin血清做Western blot分析显示,在Mr为92 000处有1条明显的区带,证明是抗β-catenin特异性抗体.从人乳腺癌细胞株MCF-7和T-47D提取全细胞蛋白,经用所制备的β-catenin抗体反应,均观察到β-catenin蛋白的表达.人乳腺组织切片经抗β-catenin抗体免疫组化染色,在正常乳腺组织细胞膜中可见棕黄色颗粒,而在乳腺癌组织的细胞浆或细胞核中可见棕黄色颗粒.结论制备了高效价、特异性的兔抗β-catenin抗体.用该抗体检测证实,正常乳腺组织β-catenin表达在细胞膜中,而乳腺癌组织β-catenin则在细胞浆或细胞核中表达,提示乳腺癌发生后β-catenin由细胞膜易位入细胞浆或细胞核中表达,这有助于乳腺癌的临床早期诊断.
关键词：β-catenin抗体乳腺癌细胞系免疫组织化学染色
分类号：R392.11(医学免疫学)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 117-120 )
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