重组人bFGF的原核表达及其高效价抗血清的制备
徐丽慧1
洪岸1
何贤辉2
汪炬1
1.暨南大学生物工程研究所,广州 510632;暨南大学广东省生物工程药物重点实验室,广州 510632;暨南大学教育部基因组药物工程研究中心,广州 5106322.暨南大学组织移植与免疫教育部重点实验室,广州 510632
摘要：目的以重组人碱性成纤维生长因子为免疫原,制备高效价抗hbFGF抗血清.方法通过PCR方法改造5'编码区的12个密码子,构建hbFGF原核表达载体并在大肠杆菌(E.coli)中表达,以纯化的hbFGF免疫新西兰兔,制备高效价抗血清,用于重组hbFGF的免疫印迹分析.结果经过改造的hbFGF基因在E.coli中获得较高水平表达.从可溶性部分纯化得到纯度95%以上的重组hbFGF,以该重组蛋白免疫兔子,在二次加强后以间接ELISA检测抗血清效价可达1:512 000.免疫印迹分析显示该抗血清与E.coli中表达的重组hbFGF和标准hbFGF均有特异性反应,但与某些细菌蛋白存在弱交叉反应,经E.coli菌体蛋白吸附的抗血清,与菌体蛋白的弱交叉反应消失.结论以纯化的重组hbFGF为免疫原制备了高效价的特异性抗血清,经菌体蛋白吸附可消除存在的交叉反应性.
关键词：碱性成纤维生长因子可溶性表达抗血清交叉反应性
分类号：R392.12(医学免疫学)Q78(基因工程（遗传工程）)
资助基金：国家科技重大专项(2002AA2Z3344)广东省科技计划(2001A1090208)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 186-189 )
英文信息