人毛乳头细胞HSPC016基因在大肠杆菌中的表达和鉴定
邹锋1
郝飞1
宋志强1
易勇2
郝进1
钟华1
叶庆佾1
1.第三军医大学西南医院皮肤科,重庆 4000382.第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室,重庆 400038
摘要：目的构建人毛乳头细胞HSPC016基因的原核表达载体,诱导其表达并对目的蛋白基本生物学特性进行鉴定.方法采用PCR技术从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,克隆至pMD18-T载体,双酶切回收纯化目的片段后连接至同样酶切回收的表达载体pET-28a(+)质粒中.重组质粒经酶切及测序鉴定后转化工程菌E.coli BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,UVP图像扫描分析并对目的蛋白进行N-端氨基酸测序鉴定.结果采用PCR技术成功地从pcDNA3.1(+)/HSPC016中扩增出195bp目的基因,序列分析显示HSPC016基因ORF由195bp组成并与GenBank公布序列完全一致.原核表达载体pET-28a(+)/HSPC016转化工程菌E.coli BL21并经诱导后,SDS-PAGE电泳鉴定:目的蛋白Mr约为7 200,与理论预测值相吻合;UVP扫描表明目的蛋白表达率约20%.N-端氨基酸测序结果与预期序列完全一致.结论 HSPC016基因能通过原核载体pET-28a(+)及工程菌E-coli BL21进行高效、正确地表达,为研究HSPC016基因表达的生物学意义奠定了基础.
关键词：毛乳头细胞HSPC016基因原核表达
分类号：R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家自然科学基金(30200249)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 212-215 )
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