质粒介导的RNAi抑制SARS-CoV复制和感染
严春晖1
倪兵2
刘锋3
姬西宁3
1.解放军161医院泌尿外科,武汉430010;第三军医大学西南医院泌尿外科,重庆4000382.第三军医大学免疫学教研室,重庆4000383.第三军医大学西南医院泌尿外科,重庆400038
摘要：目的研究RNAi作为治疗SARS-CoV感染新策略的可能性. 方法选择并克隆针对SARS-CoV编码基因的共同前导序列非结构蛋白-1(Non-structure protein 1, NSP1)的siRNAs;RT-PCR和FACS法检测所选取的siRNAs对NSP1基因抑制的特异性和有效性;利用MTT法检测选取的siRNAs对病毒感染的细胞生存率的影响;空斑形成实验证实在siRNAs存在下病毒量减少情况;RT-PCR和Western-blot法进一步证实感染细胞中S和N基因在mRNA和蛋白水平的表达情况.结果结果显示重组质粒衍生的靶向SARS-CoV NSP1的siRNAs能特异地抑制靶序列表达;在体外培养的Vero E6细胞中能显著抑制SARS-CoV的复制与繁殖.感染1 d后,RT-PCR和Western-blot结果显示,同对照组相比,SARS-CoV的S和N基因的mRNA和蛋白质表达均显著减少.结论 NSP1序列是SARS-CoV的RNAi策略的有效靶标,这些siRNAs很可能广泛地抑制了SARS-CoV亚基因组的合成及随后的蛋白质表达.
关键词：严重急性呼吸器官综合征RNA干扰NSP1小干扰RNA
分类号：R512(传染病)
资助基金：国家自然科学基金(30400437)国家重点基础研究发展计划（973计划）(2003CB514108)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 358-361,365 )
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