人BLyS免疫抑制分子的克隆、表达及纯化
高会广1
何凤田2
府伟灵3
李蓉芬2
陈麟凤2
卞爱娜2
吉清2
戴双双2
1.第三军医大学西南医院检验科,重庆400038;第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆4000382.第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆4000383.第三军医大学西南医院检验科,重庆400038
摘要：目的用异源性T辅助细胞表位修饰人可溶性BLyS突变体(msBLyS),构建和表达BLyS的新型免疫抑制分子.方法经PCR方法构建msBLyS cDNA,然后分别与鸡卵清溶菌酶(HEL)或卵清蛋白(OVA)Th表位DNA序列重组,行序列测定后,构建于高效原核表达载体pQE-80L并转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达,Ni-NTA层析纯化后,通过细胞增殖实验检测融合蛋白的生物学活性.结果 DNA测序表明,重组HELmsBLyS和OVAmsBLyS的DNA序列与文献报道的序列完全一致.HELmsBLyS和OVAmsBLyS在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达.经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度可达90%以上.活性检测发现,重组蛋白均不能促进Raji细胞增殖.结论成功构建了BLyS的免疫抑制分子,并获得了高效表达及纯化,纯化产物已丧失了sBLyS所具有的细胞增殖活性,为进一步探讨其治疗作用打下了基础.
关键词：B淋巴细胞刺激因子Th表位DNA序列免疫抑制分子
分类号：R730.3(一般性问题)
资助基金：国家自然科学基金(30370319)国家自然科学基金(30271228)国家自然科学基金(30400187)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 370-373 )
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