密码子的鸡体偏嗜性优化增强H5亚型禽流感HA基因的表达水平和免疫原性
姜永萍1
张洪波1
李呈军1
步志高2
张芳芳1
于康震3
陈化兰1
1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,1500012.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,哈尔滨,1500013.农业部畜牧兽医总站,北京,100026
摘要：目的用鸡偏嗜性密码子替换H5亚型禽流感病毒A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]的保护性免疫原HA基因的密码子,优化和构建了基因optiHA5,以提高H5亚型禽流感DNA疫苗的表达水平和免疫保护效果.方法利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR法及限制酶切法构建了密码子优化的HA基因(optiHA5),并将其插入表达载体pCI构建了DNA疫苗质粒pCIoptiHA5;将pCIoptiHA5和表达GD/1/96(H5N1)HA基因的质粒pCIHA5通过间接免疫荧光法和Western-blot分析检测转染293T细胞后瞬时表达的HA抗原蛋白;随之将pCIoptiHA5及pCIHA5分别以100 μg和10 μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡,4周后用100 LD50的HPAIV GD/1/96(H5N1)鼻腔途径进行攻击.结果间接免疫荧光法和Western-blot分析表明基因optiHA5表达水平显著高于野生型HA基因;免疫SPF鸡后,100 μg pCIoptiHA5可形成75%的免疫保护,100 μg pCIHA5可形成50%的免疫保护;10 μg pCIoptiHA5可形成对免疫鸡75%的部分免疫保护,而10 μg pCIHA5则基本不能形成免疫保护;pCIoptiHA5诱导的HI抗体水平远远高于pCIHA5.结论试验结果表明,HA基因密码子的优化可显著提高HA基因体外表达水平和H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,提高免疫原性,增强免疫保护效果.
关键词：禽流感H5亚型密码子优化的HA基因DNA疫苗免疫保护
分类号：R511.7(传染病)
资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）(G1999011902)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 377-381 )
英文信息