CDR3突变提高抗TNF-α Fab段的亲和力
汪保安
陈晓穗
王琰
王欲晓
曲佳
周丽君
1.海军总医院中心实验科,北京,1000372.海军总医院中心实验科,北京,1000373.海军总医院中心实验科,北京,1000374.海军总医院中心实验科,北京,1000375.海军总医院中心实验科,北京,1000376.海军总医院中心实验科,北京,100037
摘要：目的通过抗体库技术在CDR3区引入限定性突变以提高抗TNF-α抗体Fab的亲和力.方法首先合成含CDR3区突变的寡核苷酸,限定突变率以保持50%～70%的亲本序列,通过重叠延伸PCR的方法引入突变,构建突变库,再以硫氰酸铵溶液作洗涤液,筛选亲和力得到提高的特异性克隆,用非竞争性ELISA法测定亲和常数.结果从轻链突变库中筛选得到1个活性提高的特异性克隆K8,在第93位发生N→R突变,其亲和常数为2.8×108 L/mol,较亲本抗体(0.1×108 L/mol)提高了近28倍;从重链突变库中筛选得到多个活性增高的克隆,部分克隆测序显示96、97和100 d位置发生R→K、Y→Q、M→L突变的几率最高,且对亲和力提高贡献大.测定了10个变种的亲和常数,分别为0.2×108、0.22×108、1.8×108、3.2×108、3.3×108、3.5×108、3.7×108、4.0×108、 6.3×108和6.5×108 L/mol,最大的提高了近65倍.结论 CDR3区的限定性突变可显著提高抗体亲和力.
关键词：亲和力成熟CDR3突变肿瘤坏死因子α
分类号：R392.11(医学免疫学)
资助基金：北京市自然科学基金(5052025)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：5( 388-392 )
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