幽门螺杆菌UreB单克隆抗体的制备及尿素酶活性抑制能力的研究
吴亚男
邹全明
罗萍
郭刚
王晓勤
1.第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000382.第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000383.第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000384.第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,4000385.第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室,重庆市生物制药工程技术研究中心,重庆,400038
摘要：目的制备抗幽门螺杆菌尿素酶B亚单位(UreB)单克隆抗体,并检测其对尿素酶活性的抑制能力.方法以重组UreB蛋白为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗UreB单克隆抗体,用ELISA检测mAb的效价、亲和常数;用Western blot检测mAb的特异性.将尿素酶与单克隆抗体预孵育后加入含有尿素和酚红的缓冲液,于550 nm测定单克隆抗体对尿素酶活性的抑制能力.结果得到5株稳定分泌抗UreB的单克隆抗体的杂交瘤细胞:1D5、9E1、 3A2、1D6、 6E6.测定抗体亚型:1D5,9E1, 3A2为IgG1,1D6、6E6为IgG2a,亲和常数分别为4×108、4.6×108、2.8×108、 2×109、3×109 L/mol. Western blot鉴定5种单克隆抗体均能和重组UreB及全菌蛋白中的UreB抗原发生特异性结合,且均不与肠道常见菌发生交叉反应.5株单克隆抗体中只有6E6具有对尿素酶活性的抑制作用,且抑制率与单克隆抗体剂量相关.结论制备了5株稳定分泌抗UreB抗体的杂交瘤细胞株,产生的单克隆抗体效价高且特异性好,其中6E6能抑制尿素酶活性.本研究为探讨尿素酶的作用机制、UreB的纯化及Hp的临床诊断和治疗奠定了基础.
关键词：尿素酶B亚单位单克隆抗体尿素酶活性
分类号：R573.6(消化系及腹部疾病)R378.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
资助基金：国家科技攻关项目(96-901-01-54)军队医药卫生科研项目(98D044)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 393-396 )
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