体外转录制备的siRNAs对SARS-CoV复制的抑制作用
石孝民1
周高标1
毛丽伟2
姜曼2
黎万玲2
何仰东2
吴玉章2
倪兵2
1.解放军空军总医院泌尿外科,北京,1000362.第三军医大学全军免疫学研究所,重庆,400038
摘要：目的体外研究针对SARS-CoV RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)对SARS-CoV感染的抑制效应.方法利用Ambion公司在线设计工具,设计出4条针对RdRp基因的siRNAs,并在体外利用试剂盒进行转录合成.在SARS-CoV感染前1 d,将这4条体外转录的siRNAs用Lipofectamine2000试剂转染入Vero E6细胞中.感染后,每天观察感染细胞的细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE).第5天,用空斑形成实验(Plaqueformation unit,PFU)检测感染细胞培养上清液中SARS-CoV滴度.结果CPE结果显示,在感染后的前4 d,各siRNAs均能有效地保护细胞免受感染;在第5天,4条siRNAs中有3条仍能有效保护细胞不被感染.PFU实验结果显示,在第5天,所有siRNAs转染的细胞培养上清液中,SARS-CoV的滴度均显著低于阳性对照(P＜0.001).结论实验结果表明针对SARS-CoV的RdRp基因的siRNAs能有效而特异地抑制该病毒在哺乳动物细胞中的复制和繁殖,提示如果应用合适的给药途径,RNAi策略可以用于体内抑制SARS-CoV的感染.
关键词：严重急性呼吸器官综合征RNA干扰RNA依赖性RNA聚合酶小干扰RNA
分类号：R512(传染病)
资助基金：中国科学院项目（非规范项目）(30400437)科技部科研项目(SARS;2003CB514108)
论文发表日期：2005-01-01
在线出版日期：2025-08-15（本平台首次上网日期，不代表文献的发表时间）
页数：4( 438-441 )
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